浮游植物定量及叶绿素a 测定
2.4.2.1 浮游植物定量
个体计数仍是目前常用的浮游生物定量方法。计数浮游生物时，需使用计数框来限定待计数样品的体积或面积，计数框的长、宽、高 (深) 用测微尺或卡尺准确测量。常用计数框有0.1 mL 和1 mL 两种。计数前要将样品充分摇匀，然后用滴管在水样中部吸液移入计数框内。移入之前要将盖玻片斜盖在计数框上，样品按准确定量注入，在计数框中一边进样，另一边出气，这样可避免气泡产生，注满后把盖玻片移正。计数片子制成后，稍候几分钟，让浮游植物沉至框底，然后计数。不易下沉到框底的生物，则要另行计数，并加到总数之内。浮游植物计数时，吸取 0.1 mL 样品注入 0.1 mL 计数框，在 10 × 40 或8 × 40倍显微镜下计数，藻类计数 200 个视野，计数两片取其平均值。如两片计数结果个数相差 15%以上，则进行第三片计数，取其中个数相近的两片平均值。
藻类计数亦可用长条计数法，选取两相邻刻度从计数框的左边计数到计数框的右边成为一个长条。在长条计数法时，方格的底边和顶边分别为计数边和不计数边，统计移过中心垂线的浮游生物。与底边刻度相交的个体，应计数在内，与顶边相交的个体，不计入在内，与底边和顶边刻度都相交的个体，以生物体的中心位置作为判断的标准，也可以在低倍镜下，按上述原则单独计数，很后加入总数之中。计数时，首先旋转目镜的位置使中心线与计数框的一边重叠，再移动载物台，逐步计数。也可用直尺式目镜测微尺进行长条计数，即直尺相当于中心垂线，顶端刻度相当于顶边，底端刻度相当于底边。一般计数 3条，即第 2、5、8 条，若藻体数量太少，则应全片计数。硅藻细胞破壳不计数，硅藻细胞空壳可按中心纲和羽纹纲分别单独计数，但不加入总数之中，仅用于硅藻计数的校正。若计数种属的组成，分类计数200个藻体以上。用划“正”字的方法，则每划代表一个个体，记录每个种属的个体数。个体计数时，单细胞者一个细胞为一个体，定形群体者一群为一个体，不定形群体者按视野内的具体分散状态各定为一个体。本书研究采用长条计数法。
把计数所得结果按下式换算成每升水中浮游植物的数量:
煤矿塌陷塘环境生态学研究
式中:N为每升水中浮游植物的数量(ind/L);A为计数框面积;AC为计数面积(mm2)，即视野面积×视野数或长条长度×参与计数的长条宽度×镜检的长条数;VW为1L水样经沉淀浓缩后的样品体积(mL);V为计数框体积(mL);n为计数所得的浮游植物的个体数或细胞数。
2.4.2.2 叶绿素a测定
叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素。通过测定浮游植物叶绿素a，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化指标之一。
(1)水样的采集与保存
可根据工作需要进行分层采样或混合采样。湖泊、水库采样500mL，池塘300mL，采样量视浮游植物量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000mL。采样点及采样时间同“浮游植物”。
水样采集后放在阴凉处，避免日光直射。并立即进行测定前的预处理，如需经过一段时间(4～48h)方可进行预处理，则将水样保存在低温(0～4℃)避光处。在每升水中加入1%碳酸镁悬浊液1mL，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下(-20℃)很长可以保存30d。
(2)仪器设备
进行叶绿素a的测定时，所需的仪器设备有:分光光度计、真空泵、离心机、乙酸纤维滤膜(孔径0.45um)、抽滤器、组织研磨器或其他细胞破碎器、碳酸镁粉末、90%丙酮。
(3)实验步骤
1)以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大(约为50kPa)。水样抽完后，继续抽1～2min，以减少滤膜上的水分。如需短期保存1～2d，可放入普通冰箱冷冻，如须长期保存(30d)，则放入低温冰箱(-20℃)保存。
2)取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6～8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2～3mL的90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。用离心机(3000～4000r/min)离心10min，将上清液倒入5mL或10mL容量瓶中。
3)再用2～3mL的90%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1～2次，用90%的丙酮定容为5mL或10mL，摇匀。
4)将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。即以663nm、645nm、630nm波长的吸光度依次减去750nm的吸光度，作为这3个波长的真正吸光度。
(4)计算方法
叶绿素a的含量按如下公式计算:
叶绿素a(mg/L)=
煤矿塌陷塘环境生态学研究
式中:D为吸光度;V1为提取液定容后的体积(mL);V为水样体积(L);δ为比色皿光程(cm)。
测定浮游植物初级生产力的标准方法
测定浮游植物初级生产力的标准方法主要有：
1、植物生物量法：即测定浮游植物的物质量，通过测定物质量的变化来计算生产力。
2、植物分子量法：测定浮游植物的分子量，从而统计生产力。
3、植物碳同位素法：测定浮游植物碳同位素的比例，从而统计生产力。
4、植物生长曲线法：根据浮游植物生长曲线的变化，从而统计生产力。
5、植物生物活动法：测定浮游植物的生物活动，如光合作用、呼吸作用等，从而统计生产力。
怎么测定浮游动物的密度?
先测这片水域中浮游生物的密度,取一定量的样品,再与等量的纯净水比较质量,然后滤掉浮游生物再比较一次.
由于浮游生物密度一般接近水,所以除非测量工具十分精密,测出来的就是水的密度.
浮游植物取样方法有哪些
浮游植物样品采集参照文献( *环保总局,2002 )的方法.定性样品用孔径约0.064 mm的25号浮游生物网在水面下约0.5 m处以适当的速度作“∞”字形来回拖动1～3 min,获得的浓缩样分为两份,一份立即用适量的鲁哥氏液固定,另一份活体样品于24小时内镜检.定量样品用5 L有机玻璃采水器采集,取上层（离湖面0.5 m）,中层（0.5 H,H为采样时实测水深）,下层（离湖床0.5 m）三层水样等体积混合,取1L装入广口塑料瓶,加入1.5%的鲁哥氏液固定,水华藻样需酌情加量,以使固定后水样呈棕黄色为准.
定性样品直接在显微镜（OLYMPUS,CX31）下鉴定浮游植物的种类.部分样品按胡鸿钧等（1980）方法进行酸处理后,在油镜下鉴定硅藻种类.所依照的参考文献有（Geitler L．,1932；Jao Chin-chin,1947；Rawson D.W. ,1956；韩福山,19581982；广濑弘幸,1977；Robert Edward Lee．；1989；沈韫芬1990；Komárek J,2002；朱浩然,19912007；曾呈奎,毕列爵,2005等）
浮游动植物底栖动物采样
底栖动物的采集工具种类很多，目前国内在采集方法和采集用具上，还没有统一规范，但基本的方法用具是一样的。
采集定性定量过程中需要下列器具及药品：
水体地形图 深水温度计 彼得生采泥器 一般温度计
带网夹尼器 扭力天平 三角拖网 托盘天平
脸盆 解剖镜 水桶 显微镜
标签 培养皿 铅笔 指管瓶30～50ml
记录本 试剂瓶1000ml 毛巾 广口瓶250ml
纱布 量筒 胶布 抄网
解剖针 分样筛40目 放大镜 酸度计
塑料带 甲醛 解剖盘 酒精
小镊子 吸管 绳索 毛笔
盘称 滤纸
采集工具：盒式采泥器及蚌斗式采泥器（即改良彼得生采泥器）。其原理是利用采集工具本身具有的重量，沉入水底，取出一定面积的底泥，从而推算某一水体中底栖生物的数量。此外还简介带网夹泥器。
采样点的选择：采样的代表性要强，因此应选择那些水域特性的地区和地带，如水库、江河流域内的库湾部分，水库的近坝区，消落区，沉入水下的旧河床地段等。采样点要反映整个水体的基本状况，因此在选点之前，要根据水体的详细地形图，对其形态及环境进行了解，从而根据不同环境特点（如水深、底质、水生植物等等）设置断面和采样点。断面上设置的点是直线的，每隔一定距离设一采样点。断面上采样点的多寡使环境而酌情增减，通常设断面必须考虑几个因素：如底质、水深、水生高等植物的组成、如水口、出水口、湖湾，以及受污染地区等。断面和采样点的设置多少，是具体情况而定。每一段面积断面上的每一采样点的位置都需标在地图上，采集时可按图上编号顺序进行。
样品的采集：采样时间视调查任务而定。鉴于底栖动物生长、繁殖的速度比浮游动物较慢，所以，一般每季度采样一次，很低限度应在春季和夏末秋初各采样一次。如水库，需在水库很大蓄水时和很小蓄水时进行。
采样时，应事先记录当时的天气、气温、水温（表层、底层）、透明度、水深，然后进行采样，在记录底质及水生植物情况。
采样时每个采样点上的大型和小型底栖动物各采2次样品。带网夹泥器采得样品后，连网在水中剧烈洗涤摇荡，洗去污泥，网口要保持禁闭，然后提到船上打开，拣出全部螺、蚌、蚬，放入广口瓶中，并贴上标签（写明地点、编号、日期），然后带回室内处理。蚌斗式采泥器采得的泥样，先倒入40目／寸的铜丝分样筛中，然后将筛底放在水中轻轻摇荡，洗去样品中的污泥（若样品量大可分几次洗涤），很后将筛中的渣滓倒入所料袋中，并放入标签，将袋口缚紧带回实验室分检。这一过程也可将采的泥样倾入脸盆中，到岸边筛选，以免采样时间过长。
定量样品采完后，分别在各采样点上采一定数量泥样作定性标本用，还可在沿岸带和亚沿岸带的不同生境中，用抄网捞取一些定性样品。来不及分检的样品，应放入冰箱内保存，以免虫体腐烂不利于分析。
样品的处理和保存：将上述采得的样品当场或带回室内进行分检。将塑料袋内的样品倒入分样筛内，在自来水中冲洗（或在岸边水中筛洗），直至污泥完全洗净，然后将渣滓倒入白色解剖盘内，加入清水，检出水蚯蚓和昆虫幼体，放入之广口瓶中固定保存。直至检完为止。对于水蚯蚓，可利用其对温度的敏感性，在装有样品的解剖盘上，放一纱布，覆盖样品，然后倒入40℃左右的热水，水蚯蚓及钻到纱布上面来，这样就一网打尽，效果较好。
标本需用小镊子、解剖针或习惯检选，柔软较小的动物也可用毛笔分检。此时，要避免损伤虫体。
每一塑料袋的样品检完后，需将袋内的标签放进指管瓶内，并在每瓶外面贴上一个同样的标签。
检选出的底栖动物分别固定分装在样瓶中，水蚯蚓应先麻醉，使其舒展再固定，一般把水蚯蚓放在培养皿中，加少量水，然后每隔10分钟滴加95％酒精，直至虫体全部伸直。然后用4～10％甲醛液固定，或固定1～2日后，移入70％酒精中封存。
软体动物的螺蚌可保存于70～80％的酒精中，4～5天再换一次酒精即可。也可用甲醛液固定，但务必加入少量苏打或硼砂中和酸性甲醛，不然，软体动物的钙质壳，会被酸性甲醛腐蚀。此外，软体动物亦可群诶葬后，将壳干燥保存。
昆虫及甲壳动物，可放入养萍中用75％酒精固定。昆虫成虫亦可制成干标本保存。
定性定量：对采得的标本，必须进行正确的鉴定，分门别类，尽可能鉴定到种，然后分别计数和称重，底栖动物的生物量测定一般采用称重法和排水体积法。称重法较常用，称重前，先把样品放在吸水纸上，轻轻翻滚，以吸去体外附着水分，然后称其重量。大型种类应吸至吸水纸上没有潮斑为止，小型种类在滤纸上放约一分钟即可。大型双壳类称重前，应细心将贝壳分开，取出其内水分。软体动物可用托盘天平或盘秤称，蚯蚓和昆虫用扭力天平称，很后重量都换算成克。一般情况下干重比湿重更能说明问题，所以，有条件的话，尽量测其干重。
鉴定计数，称重的数值需随时计入记录本中。注意勿将样品混淆，称重后把样品放回原来的样瓶中妥善保存。
很后，把所得的数据换算成一平方米面积上的个数（密度）和重量（生物量g/m2）。可按下表记录采集、计数、称量、换算结果。这样，采样水体该采样点的底栖动物种类组成、密度及生物量就一目了然了。
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